Аллахвердиев А.М. Способы синхронизации возбудителя тропической малярии

Первое всесоюзное совещание по проблемам зоокультуры. Тезисы докладов. Часть третья. Москва, 1986. С. 96-98.

Литературные данные о способах синхронизации малярийных паразитов немногочисленны и имеют ряд ограничений.

Для синхронизаций культур возбудителя тропической малярии широко используется сорбитал или его комбинация с желатином (Lambors et al., 1979; Kilejian, 1960). Сорбитол лизирует эритроциты, заряженные зрелыми формами паразита, а после синхронизаций кольцевидные стадии в культурах составляют около 95 %. В тo же время при использования сорбитола в культуре лизируется так­же значительная часть интактных эритроцитов, а синхронизация сохраняется лишь 1-2 поколения.

В настоящем сообщении представляются предложенные нами способы синхронизации культур эритроцитарных стадий возбудителя тропической малярии Р. falciparum. Данные приёмы основаны на том, что паразиты не развиваются   полностью в средах, где отсутствуют какие-либо необходимые компоненты. Мы использовали среду МЕМ-4 (с 10 % сывороткой) и RPMI-1640 (без сыворотки). Такие условия позволяют паразиту достигнуть стадии трофозоита, но не позволяют перейти в стадию шизонта и завершить полный цикл внутриэритроцитарного развития.

Ниже приводятся три способа синхронизации паразитов в куль­туре.

Способ I. Культура малярийных паразитов с исходной паразитемией 2-3 % из питательной среды RPMI-1640 переносится в сре­ду МЕМ-4. В данной среде через 72-96 часов замедляется развитие паразитов, следовательно в культуре независимо от исходного со­става популяций паразитов остается 92-97 % трофозоитов. После то­го, проводится пересев с исходной паразитемией 0,3-0,5 % и куль­тивируется в среде RPMI-1640.

Способ II. Синхронизация культур малярийных паразитов в данном способе осуществляется с использованием неполной питательной среды RPMI-1640 (без сыворотки.). Культура малярийных паразитов культивируется в данной среде в течение 24-48 часов. После того в культуре трофозоиты составляют около 95 %, Затем проводят пе­ресев с исходной паразитемией 0,3-0,5 % и продолжают культивиро­вание в полной среде с 10 % сывороткой.

Способ III. Известно, что путем центрифугирования в стеклянном капилляре эритроциты, зараженные P. falciparum можно разделить по возрасту (Л.Н. Гринберг, 1985). Исходя из этих представ­лений нами предпринята попытка синхронизировать культуры маля­рийных паразитов с использованием данного способа.

Суспензию зараженных эритроцитов P. falciparum с исходной паразитемией 5-6 %; гематокритом 30-50 % набирают в капилляр диа­метром 1,0 мм и длиной 75 мм, закрывают замазкой и центрифуги­руют в гематокритной центрифуге 10 мин при 15000 g. В зависимости от плавучей плотности зрелые паразиты концентрируются в верх­ней части капилляра в виде темно-коричневого цвета (до разделе­ния общий состав популяций паразитов был: 12, 5 % кольцевидных, 47,5 % трофозоитов и 40 % шизонтов, а после разделения в верхней части она соответственно составляла: 1,6; 8,1; 90,3 %). Соблюдая стерильность, отделяют эту часть и вводят в культуру со свежими эритроцитами. Через 24 часа проводят пересев с исходной паразитемией 0,3-0,5 %.

Таким образом, предложенные способы позволяют синхронизировать культуру малярийных паразитов в течение 24-96 часов не используя химические и др. агенты. Они являются более физиологи­ческими и могут быть используемы для синхронизации культуры малярийных паразитов.